毕赤酵母固态发酵诱导产酶

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一般来说外源蛋白在毕赤酵母中的表达都是采取液态发酵的方式，下面给大家介绍一种毕赤酵母固态发酵诱导产酶方法。当然这里的固态发酵和我们经常说的发酵饲料之类的固态发酵还不一样，更像是固定化发酵。

1固态发酵方法

①准备固态发酵瓶，将聚氨酯海绵切割成约为 1 cm3的立方体，称取 1.1 g 洁净的聚氨酯海绵立方体置于 100 mL 锥形瓶中，进行高压蒸汽灭菌。

②接种，将活化的工程菌 GS115-.0 以 1%的接种量接种于 BMGY 培养基，摇匀后分装至装有无菌海绵立方体的锥形瓶和无菌的空锥形瓶。

③培养：在进行 30 ℃静置的固态发酵前，将锥形瓶置于 30 ℃，200 r/min 振荡培养 5 min，使海绵立方体充分吸收 BMGY 培养；

④取样，选取海绵块，通过注射器将海绵块中的液体挤压到无菌离心管中，再进行相关处理和分析。

⑤甲醇诱导，固态发酵采用喷壶将甲醇喷洒至海绵立方体表面。

固定化微生物技术是将特选的微生物固定在选证的载体上，使其高度密集并保持生物活性，在适宜条件下能够快速、大量增殖的生物技术。这种技术应用于废水处理，有利于提高生物反应器内微生物（尤其是特殊功能的微生物）的浓度，有利于微生物抵抗不利环境的影响，有利于反应后的固液分离，缩短处理所需的时间。

2.固态发酵和液态发酵的差异

▼生物量的影响

固态发酵获得的生物量比液态发酵的生物量高出22.3%。

▼固、液态发酵对重组菌产酶量的影响

固态发酵在获得较高的生物量的情况下，外源蛋白表达量却非常低。

3.讨论

在固态发酵中液态的培养基吸附在蓬松的基质（聚氨酯海绵）上，面积/体积比较高，培养基中的氧气含量更高；而液态发酵由于面积/体积比较低，培养基中的氧气含量较低，酵母将消耗大量能量用于细胞维持。因此，相比于液态发酵，固态发酵在细胞维持上消耗较低的能量，同时获得了更多的生物量。

但是在获得较高生物量的前提下，外源蛋白的表达水平却相对较低。分析其原因主要可能是①固态发酵过程中并没有给毕赤酵母一个稳定的甲醇浓度。②甲醇很难从表面扩散到海绵体内部③不利于产物的累积。

虽然该方法并没有获得较高的表达，但是仍然有借鉴意义，可以从以下几方面考虑：

①生产菌体

②生长偶联系产品也许可以应用

③想办法改善甲醇诱导环境