细胞染色--台盼蓝+AO/PI

写在前面：在细胞培养工作中，常需要了解细胞状态和鉴别细胞死活，用于确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，来进行下一步的实验操作，因此，就引入了我们今天要说的两种细胞计数染料：台盼蓝+AO/PI。

台盼蓝染色法

台盼蓝：蓝灰色粉末；溶于水，微溶于乙醇，不溶于其他有机溶剂；细胞活性染料，是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一，常用于检测细胞膜的完整性，细胞是否存活。

台盼蓝

台盼蓝化学式

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝染色的K562结果图，蓝色为死细胞

常用染色浓度：一般成品试剂是0.4%的储存液，使用时需稀释10倍

台盼蓝染色的优点：价格低

台盼蓝染色的缺点：①PBMC分离过程中会有红细胞的残留，其大小与PBMC 接近，台盼蓝法不能分辨红细胞与活的PBMC，易造成浓度与活率的差异；②CHO 细胞在培养过程中会产生细胞碎片和杂质，台盼蓝法无法进行准确区分；

AO/PI染色法

AO/PI：是指吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）共同组成

吖啶橙（，简称AO）：可以发出绿色荧光的DNA 结合染料

碘化丙啶（，简称PI）：可以发出红色荧光的DNA 结合染料组成

染色原理：AO 可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；PI 只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光。当两种染料均存在于细胞核内，在合适的AO、PI 配比下，两种染料发生能量共振转移，死细胞在绿色通道下（EX:525/30,EM:600LP）激发出红色荧光。

AO/PI染色的K562结果图，红色为死细胞

染色浓度：一般都是买的成品试剂

AO/PI染色的优点：①弥补了台盼蓝染色法的不足；②由于AO 和PI 为DNA结合染料，因此可有效排除杂质以及红细胞的干扰，确保对样品进行准确计数；

AO/PI染色的缺点：成品试剂的成本较台盼蓝高